Cell - Based ELISA protokol

ELISA , nebo ELISA test se používá jako diagnostický nástroj v medicíně a v biologickém výzkumu ke kvantifikaci množství konkrétního proteinu . ELISA používá protilátky pro detekci proteinu zájmu a činidla , které vytváří požadovanou barvu. Množství barvy se vztahuje k množství proteinu . Buněčná kultura

Buňky by měly být umístěny do jamek 96- jamkové destičce s mikro- 100 litrů růstového média a buňky ponechány přes noc usadit . Pokud jste studoval reakci buněk se k faktoru by buňky být sérum vyhladovělé po dobu 24 hodin a poté stimulovány faktorem v rámci studie.
Fixace a primární protilátka

Po odstranění média , jsou buňky ošetřeny s médiem , jako je formaldehyd , 3 procenta nebo methanolu . Buněčná membrána musí být permeabilizovány , abyprotilátka proniknout do buňky . Permeabilizace může být dosaženo použitím 0,1 procenta Triton , pokud methanol předtím nebyl použit . Nespecifická vazba může být zabráněno pomocí 10 procent fetálního telecího séra naředěn v roztoku ve fosfátovém pufru . Po odstranění bloku , můžebýt použita primární protilátka a inkubována po dobu jedné hodiny .
Sekundární protilátky a Stain

Vyjměte primární protilátku a mytí třikrát . Přidat sekundární protilátky spojené s detekčním činidlem, jako je křenová peroxidáza . Inkubujte po dobu jedné hodiny. Washington Přidat chemiluminiscenční substrát. Vyvinout a skenovat deska pro barevné intenzity .