Metody měření NADPH-oxidáza

enzym NADPH oxidáza je identifikován jako výrobce reaktivních forem kyslíku během procesů včetně růstu cévních hladkých svalových buněk. Tyto reaktivní formy jsou spojeny s řadou onemocnění, včetně hypertenze, diabetes, rakovina a zánět, metody pro sledování aktivity tohoto enzymu je rozhodující pro možnou léčbu rozvoj. NADPH oxidázy

NADPH oxidázy patří do skupiny enzymů, které pomáhají při přenosu elektronů mezi NADPH a kyslíku. Nicméně, NADPH oxidázy má jedinečnou schopnost produkovat reaktivní formy kyslíku z této reakce, v porovnání s ostatními členy rodiny, kde je reaktivní formy kyslíku vytvořené jinými prostředky. Multimerní proteinový komplex, NADPH oxidáza se skládá z membrány vázané flavocytochrome b558, který se používá jako měření značkou.
Reaktivních forem kyslíku (ROS) Generace

hlavním zdrojem ROS, zejména peroxidu vodíku, NADPH oxidáza vytvoří malé, ale konzistentní množství přes jeho izoformy vyjádřené v cévách, které jsou zapojeny v signalizačních procesů. Tato důsledná výroba může nakonec přemoci přirozené antioxidační systém, což způsobuje ztrátu ochranných látek, jako je oxid dusnatý, a vytvoření ještě výkonnějšího ROS.
Chemiluminiscenční metoda

chemiluminiscence umožňuje vysoce citlivé, automatizované měření aktivity NADPH oxidázy přes rozmezí koncentrací. Při této metodě se NADPH substrát do vzorku tkáně obsahující NADPH oxidázy. Po reakci, je generován ROS a reaguje se složeným lucigenin produkovat chemilluminescent efekt, který se měří. Luminiscence je přímo úměrná NADPH oxidázy aktivitu, neboť enzym určuje rychlost reakce.
Kinetic Assay přes
průtokové cytometrie

této metody jsou analyzovány vzorky tkáně pomocí průtokové cytometrie. Kostní dřeň je oddělen od vzorku s použitím Hanks 'Balanced Salt Solution. Specifické skvrny a detekční protilátky se přidá ke vzorku, v polystyrénových zkumavek. Vzorek se pak inkubuje, promyje Hanksova vyváženého solného roztoku s označením molekulárních sond a připravený z průtokové cytometrie. Elektronky jsou také pro srovnání a pro kalibraci průtokového cytometru. Stroj je pak běžel a měření zaznamenány.