MBP Čištění Protokoly

MBP nebo maltóza binding protein se nachází ve bakterie Escherichia coli, která je součástí střevní flóry lidí i zvířat. Čištění MBP zahrnuje řadu postupů zaměřených na separaci proteinu v složky. V molekulární biologii, MBP čištění je životně důležitý proces pro studium struktury a funkce tohoto proteinu. MBP čištění protokoly obsahují MBP rozpuštěné bílkoviny čištění, drobného MBP-fusion a maltózu vázající protein fusion tag čištění. MBP jištění Proteiny Purification

Během tohoto protokolu, technici mytí 20 ml polymerní pryskyřice amylózy roztokem Atris při pH 7,4, chlorid sodný, merkaptoethanol (ME) a ​​ethylendiamintetraoctové kyseliny (EDTA), v souladu s protokoly Online. Vzorky buněk se přidá, odstředí a analyzovány na gelovou elektroforézou. Vzorky byly také analyzovány v chromatographer, kde technici eluát nebo sledovat Řešením je složkou při průchodu chromatografické kolony.
Small Scale MBP-fúzní protein Čištění

Podle Hebrejská univerzita v Jeruzalémě, biologové používají činidlo isopropyl BD-1-thiogalaktopyranosid (IPTG), spin buněčné kultury po dobu 10 minut při 8000 otáčkách za minutu při 39,2 stupňů Celsia. Později se odstranit supernatant a míchají chladnou PBS pufru na vzorek, který je rozdělen do několika zkumavek a odstředí znovu. Vzorky jsou pak uchovávána při -112 stupňů Fahrenheita k zadní analýzu.

Maltózu vázající protein Fusion Tag čištění
tagy

Affinity jsou geneticky zkonstruované molekuly používané v molekulární biologii pro detekci a čištění proteinů. Tento protokol je komplexní soubor postupů, rozdělených do tří etap, které zahrnují výstavbu polyhistidine bílkovin značky (HisMBP) pilotní experiment vyhodnotit rozpustnost proteinu a rozsáhlou očištění MBP molekul, podle přírody protokolů . Kromě vzorků E.coli, jaké používají technici ampicilin, kanamycin, IPTG, anhydrotetracyklinu, glukózový monohydrát, mobilní lyzačního pufru, DNA polymeráza, PCR, Tris-acetát-EDTA a Ethidiumbromid.