PBMC Protokol

zmrazeného mononukleární buňky periferní krve (PBMC) jsou častým zdrojem vzorků pro výzkum, který zahrnuje imunoterapie a odpovědi na vakcíny. Zatímco některé protokoly jsou omezeny na izolaci a zmrazení fáze procesu, jiní zahrnují rozmrazování postupy. Postup izolace a zmražení

komerční směs pro podporu separace je umístěn do každého 50 ml centrifugační zkumavky a trubky jsou centrifugovány po dobu třiceti sekund. Čepice krevních zkumavek se postříkají s alkoholem před otevřením, pak antikoagulační zpracované krev pak se přenesl přes pipetou do odstředivky trubek. Plasma vrstva krve se odsaje pipetou.
Tuhnutí

buňky z předchozího kroku se pak odstředí se pufrovaného fyziologického roztoku třikrát. Poté, co se počtu buněk, budou vzorky centrifugovány poté se suspenduje v mrazivém prostředí. Exempláře v mrazivém prostředí jsou rozděleny mezi další cryovials v jednom ml částky. Lahvičky jsou uloženy přes noc v -70 °

mrazákem C a přestěhoval se k dlouhodobému skladování v kapalném dusíku na další den.
Safe Rozmrazování

Cryovials jsou přeneseny z tekutého dusíku na 37 ° C vodní lázni a vzorek se nechá rozmrznout jedno-dvaminuta. A teplé transportní média se přidá do každé lahvičky. Zředěný buněčná suspenze se odstřeďuje po dobu sedmi minut. Počet a životaschopnosti buněk se kontroluje, Je-li buňky potřebují soustředit, jsou vzorky centrifugovány dalších sedm minut. Vzorek se ředí do pracovního roztoku a odpočíval dvanáct-osmnácthodin před zahájením vyšetření v uvedeném protokolu

Reference
  Biomed Central:. Protokol pro izolaci , Kryokonzervace a Rozmrazování PBMCs sítě  
pro dárce pankreatu varhany s diabetem: Izolace mononukleárních buněk periferní krve (PBMC)
zdroje
  Los Almos National Labs: Stanovení protilátek v řešení PBMC
  vědců: Izolační lymfocytů z plné krve.