Jak si vyrobit restrikční mapě

V počátcích molekulární biologie, vědci běžně používá omezení mapování pochopení genů, které studovali. V moderních výzkumných laboratoří, je omezení mapování z velké části zastaralé, protože sekvenování stal se více široce dostupné a úspornější než v minulosti. Nicméně, tam jsou případy, kdy omezení mapě může být dostačující pro výzkumníka provádět své šetření. Celkový přístup k omezení mapování zahrnuje použití trávicích enzymů rozebrat fyzicky vzorek DNA. Jakmile budete měřit produkty trávení, můžete "složit" kousky a odvodit původní sekvenci DNA. Věci, které budete potřebovat
restrikčních enzymů
vzorků DNA
Pufr internetu Lední a horká vodní lázeň
Gelová elektroforéza zařízení
Zobrazit další instrukce
DNA Trávení

1

Přidat restrikčním enzymem do vzorku DNA. Použijte EcoR1, běžně používaný enzym, například.
2

Přidat tuto směs do tlumivého roztoku, což je v podstatě místem pro reakci nastat.
3

Zvyšte teplotu reakce, jak je uvedeno v New England BioLabs návodu. Každé omezení enzym má specifickou reakční teplotu, při které se nejlépe funguje. Kromě toho, každý enzym má specifickou nukleotidovou sekvenci, je navržen tak, aby cíl. EcoRI bude skenovat a snížit DNA na sekvence nukleotidů CAATTC. Toto přesné pořadí nukleotidů musí existovat enzymu vázat a snížit DNA. Až do tohoto bodu, všechny materiály by měly být uchovávány na ledu, aby se zabránilo nežádoucí činnost.
4

Po zatvrdnutí reakci nastat, jak je uvedeno v návodu, spusťte směs ve stroji gelové elektroforézy oddělit DNA fragmenty na základě velikosti. Nejmenší fragmenty bude pohybovat nejdál přes gelu.
5

Změřte vzdálenost ujetá každým fragmentu DNA. Těchto pět bodů by se měla opakovat s více různými enzymy zvlášť.
Konstrukce restrikční mapě
6

použitím údajů získaných z gelu, shromažďovat všechny informace, které jste našli použití různých restrikčních enzymů.
7

odvodit pořadí restrikčních míst srovnáním různých fragmentů délky produkované každý enzym. Například, pokud enzym # 1 produkoval dva fragmenty o stejné délce a enzymů # 2 produkoval tři fragmenty stejné délky, můžete k závěru, že enzym # 1 škrty v půlce DNA a enzymu # 2 řezy na DNA do třetiny.

8

Použití závěry uvedené v kroku 2, sestavit pořadí restrikčních míst na DNA.