Kompetitivní vazby Protokol testu

konkurenční vazebný test jeexperiment , který určuje vazebnou kapacitu proteinů nebo chemické látky pro specializované proteinů obsažených na povrchu buněk , tzv. receptory . Tato metoda je často používán v lékařském výzkumu , ale je také možné určit, které léky vážou na receptory a modifikovat aktivitu receptoru , což může změnit chování buněk . Mobilní Příprava

resuspendujte buňky do ledové fosfátovým pufrem ( PBS) . Opatření koncentrace proteinu potvrdit stejné hladiny bílkovin pomocí specializovaného komerčně dostupného testu bílkovin .
Testu

Přidat radioaktivita značený protein známý vázat se na receptor , na ligand , do buňky nebo tkáně pozastavení . Přidejte soutěžící , který jezkouška lék nebo protein při zkoušce a inkubují s radioaktivním ligandem a buněčné suspenze. Rozsah koncentrací zkoušené drogy by měly být studovány . Po inkubaci samostatný vázaného i nevázaného ligandu a měření radioaktivity .
Analýza dat

obvyklá opatření , jež budou stanoveny , je polovina maximální koncentrace , která inhibuje receptor jinak známý jako IC50 . Ta se počítá vynesením koncentrace na logaritmické stupnici na ose X grafu, zatímcoosa Y představuje procentuální inhibice ,sigmoid křivka , která jeve tvaru S , musí být generován . IC50 je 50 procent inhibice bod a odpovídající koncentraci lze odečíst z grafu .